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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀(guān)察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱(chēng)：小鼠食管平滑肌細(xì)胞

英文名稱(chēng)：Mouse Esophageal Smooth Muscle Cells

組織來(lái)源：食管組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠食管平滑肌分離自食管組織；食管可分為頸段、胸段和腹段，脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過(guò)膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，肌層上1/3段為骨骼肌，下1/3為平滑肌，中段為骨骼肌和平滑肌混合組成。其中，肌纖維的排列方式分為內(nèi)環(huán)形和外縱形兩層。食管的蠕動(dòng)是由食管平滑肌收縮嚴(yán)格控制，食管還有括約肌，位于環(huán)狀軟骨水平的，稱(chēng)為食管上括約肌；位于食管下端，一部分在膈上，穿過(guò)膈孔，另一部分在膈下的高壓帶，稱(chēng)為食管下括約肌。食管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠食管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠食管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類(lèi)型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A   英文名稱(chēng)：   vascuiar endothelial growth factor A   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   VEGF-A

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C   英文名稱(chēng)：   vascuiar endothelial growth factor C   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   VEGF-C

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D   英文名稱(chēng)：   vascuiar endothelial growth factor D   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   VEGF-D

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165   英文名稱(chēng)：   vascuiar endothelial growth factor 165   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   VEGF165

小鼠幽門(mén)螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human granzyme A (Gzms-A) ELISA Kit 人顆粒酶A(Gzms-A)試劑盒

Humaelaxin,RLNELISAKit 人松弛肽/松弛素(RLN)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor6-OHDA(Human6-hydroxydopamine)ELISAKit人6-羥多巴胺

銀染法組織端粒酶活性AP電泳分析試劑盒10次

MouseMelatonin,MTELISAKit小鼠褪黑素(MT)試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

Shiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大腸桿菌志賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型 0.5mgShiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大腸桿菌志賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型)

REG3A重組人 REG3A / HIP 蛋白 Protein

CCL28 Protein Human 重組人 CCL28 蛋白

IL6R Protein Human 重組人 IL6R / CD126 蛋白

Shiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大腸桿菌志賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型 0.5mgShiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139] 大腸桿菌志賀樣毒素Ⅱ型突變體(O139菌型)

CCL28 Protein Human 重組人 CCL28 蛋白

HA重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

IL6R Protein Human 重組人 IL6R / CD126 蛋白

REG3A重組人 REG3A / HIP 蛋白 Protein

小鼠食管平滑肌細(xì)胞大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT)試劑盒 ，英文名： DAT ELISA Kit

Porcine noradrenaline (NE) ELISA Kit 豬去甲(NE)試劑盒

蝦特定基因序列(FC)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T

CLIAKitforLXA4(HumanLipoxinA4)ELISAKit人脂氧素A4

體液總抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量試劑盒50次

ELISAKitVEGF雞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用