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本產(chǎn)品具有下列特點:

1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。

商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Human M-CSF Protein

產(chǎn)品中文名稱：重組人巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）

規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號：EY-01X8834
用途：僅供科研研究實驗

特點&優(yōu)勢:

標簽:無標簽

表達宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來源于：人M-CSF(Glu33-Ser190) (P09603-3) 表達的蛋白片段。

活性:通過其誘導M-NFS-60細胞增殖的能力來測定。該效應(yīng)的ED50為0.7344 ng/mL。

純度:> 95 % ，使用SDS-PAGE檢測

通過LAL法測定，每微克蛋白里內(nèi)毒素含量<0.1 EU。

產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無菌的20 mM Tris，150 mM NaCl，pH 8.0。

基因ID:1435

使用中注意事項:開蓋使用前，請先離心動?動

背景

M-CSF is a potent hematopoietic factor produced by a variety of cells,including lymphocytes,monocytes,fibroblasts,endothelial cells,myoblasts and osteoblasts.

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。

(四)誘導表達

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

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SLITRK4重組人 SLITRK4 / Slitrk4 蛋白 Protein

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Rat vitamin K1 (VK1) ELISA Kit 大鼠K1(VK1)檢測試劑盒

Humanacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISAKit 人乙酰受體抗體(AChRab)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humancommonacelymphocyticleukaemiaaigen,CALLA檢測試劑盒人普通急性淋巴細胞白血病抗原(CALLA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

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兔骨形成蛋白(BMPs)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

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CLIAKitforKLK11(HumanKallikrein11)ELISAKit人11

通用型腸桿菌(EerobacteriaceaSTX2)試劑盒20次

ELISAKitHIS大鼠組胺

重組人巨噬細胞集落刺激因子（M-CSF）IL13RA2重組小鼠 IL13RA2 / CD213A2 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8 0.5mgCDK8(Cyclin Dependent Kinase 8) 周期素依賴性激酶8抗原

SLITRK4重組人 SLITRK4 / Slitrk4 蛋白 Protein

HSPA1A Protein Human 重組人 HSP70 / HSPA1A 蛋白

TNFSF9 Protein Mouse 重組小鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白

產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷