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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Fluo-4 Calcium Assay Kit

產(chǎn)品中文名稱：Fluo-4鈣離子檢測(cè)試劑盒

規(guī)格：200T/1000T

貨號(hào)：EY-01X8528
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

保存建議:收到貨后，請(qǐng)避光保存于-20℃。請(qǐng)參閱說(shuō)明書中各個(gè)組件的存儲(chǔ)條件，自發(fā)貨之日起，按照推薦的保存條件，有效期為12個(gè)月。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

Fluo-4 鈣離子檢測(cè)試劑盒是一種基于 Fluo-4 AM 鈣離子熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的試劑盒。本試劑盒可以使用熒光顯微鏡進(jìn)行熒光成像檢測(cè)，也可以使用熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀進(jìn)行熒光的定量檢測(cè)。使用熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀還可以進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的動(dòng)態(tài)變化檢測(cè)。Fluo-4 是一種將 Fluo-3 結(jié)構(gòu)中的 Cl 離子替換成 F 離子的鈣熒光探針。由于將 Cl 離子替換成了電子吸引力更強(qiáng)的 F 離子，它的最大激發(fā)波長(zhǎng)會(huì)向短波長(zhǎng)方向偏離 10 nm 左右。這個(gè)波長(zhǎng)更接近于氬激光器的波長(zhǎng)，所以用氬激光器激發(fā)時(shí)，Fluo-4 的熒光強(qiáng)度比 Fluo-3 更強(qiáng)。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷。可直接加入到檢測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

35kDa核孔蛋白(NUP35)重組蛋白 Recombinant Nucleoporin 35kDa (NUP35)

DSC2 Protein Human 重組人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

CD79B重組小鼠 CD79B / B29 蛋白 Protein

LCN2 Protein Rat 重組大鼠 LCN2 / NGAL 蛋白

EPHA2重組人 EphA2 蛋白 (aa 585-976, His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠抗卵巢抗體(AOAb)ELISA 試劑盒  試劑盒 組裝/原裝

Ai thyroid globulin aibody against rat (ATGA/TGAB) ELISA Kit 大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)檢測(cè)試劑盒

Humanepidermalkeratin,EKELISAKit 人表皮角蛋白(EK)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAngiopoietin4,ANG-4檢測(cè)試劑盒人血管生成素4(ANG-4)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物輔酶Q含量比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

IL-1βELISAKit魚類白介素1β(IL-1β)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠骨成型蛋白-2   英文名稱：   Bone morphogenetic protein-2   規(guī)格：      英文縮寫：   BMP-2

小鼠骨成型蛋白-4   英文名稱：   Bone morphogenetic protein-4   規(guī)格：      英文縮寫：   BMP-4

小鼠骨成型蛋白受體1A   英文名稱：   Bone morphogenetic protein-Receptor 1A   規(guī)格：      英文縮寫：   BMP-R1A

小鼠免疫細(xì)胞表面抗原分子CD4+   動(dòng)?動(dòng)

大鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： Col Ⅰ ELISA Kit

Mouse myoglobin (MYO/MB) ELISA Kit 小鼠肌紅蛋白(MYO/MB)檢測(cè)試劑盒

Mouseglycogensyhasekinase,GSKELISAKit 小鼠糖原合成酶激酶(GSK)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumansimilaoRIKENcDNA3110050K21geneELISAKit人類似RIKENcDNA3110050K21基因

通用型魚濾過性毒菌敗血癥(ViralHaemorrhagicSepticaemia)試劑盒20次

ELISAKitFⅩⅢ大鼠ⅩⅢ

Fluo-4鈣離子檢測(cè)試劑盒CD79B重組小鼠 CD79B / B29 蛋白 Protein

35kDa核孔蛋白(NUP35)重組蛋白 Recombinant Nucleoporin 35kDa (NUP35)

EPHA2重組人 EphA2 蛋白 (aa 585-976, His & GST 標(biāo)簽) Protein

DSC2 Protein Human 重組人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

LCN2 Protein Rat 重組大鼠 LCN2 / NGAL 蛋白

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。