產品名稱：細胞毒性檢測試劑盒（乳酸脫氫酶法）
產品特點：細胞毒性檢測試劑盒（乳酸脫氫酶法）的相關產品：CKR-L2( G protein-coupled receptor-2 0.5mgCKR-L2( G protein-coupled receptor-2 ) G蛋白偶聯受體-2(抗原)BLVRB Protein Human 重組人 BLVRB / biliverdin reductase B 蛋白 (His 標簽)CTSD重組小鼠
產品型號：
更新日期：2024-11-19
訪問次數：671
細胞毒性檢測試劑盒（乳酸脫氫酶法）的詳細資料：
產品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產品英文名稱：LDH Cytotoxicity Assay Kit
產品中文名稱：細胞毒性檢測試劑盒（乳酸脫氫酶法）
規(guī)格：96 T/480T
貨號：EY-01X8524
用途：僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
• 分析化合物或環(huán)境因素對細胞死亡的作用。
• LDH從細胞內被釋放到培養(yǎng)基中，形成了一個可視化的顏色反應。
• 檢測范圍：10,00-100,0000個細胞/孔。
保存建議:建議收到貨后避光保存于-20°C，有效期為6個月。
運輸條件:藍冰運輸
背景
對細胞死亡或細胞毒性的評估往往是基于細胞質膜損傷來定量的。 LDH是一種穩(wěn)定的酶，存在于所有細胞類型中，并且在質膜損傷后迅速釋放到細胞培養(yǎng)基中。 因此，LDH是細胞毒性研究中使用廣泛的標記物。
本產品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
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操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環(huán)獲得產物。
(二)構建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質粒的表達菌種
1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。
(四)誘導表達
1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
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