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細(xì)胞簡介：

自然殺傷細(xì)胞 (natural killer cell，NK)是機(jī)體重要的細(xì)胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身性的發(fā)生。一種穩(wěn)定表達(dá)在NK和LAK細(xì)胞表面的LAK-1分子，120kDa，NK細(xì)胞在IL-2條件下培養(yǎng)20天LAK-1仍為陽性，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失。LAK的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。

自然殺傷細(xì)胞刺激因子（ natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 對NK細(xì)胞有刺激作用。IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白細(xì)胞調(diào)節(jié)素(leukoregulin,LR) 對NK細(xì)胞的活化和分化有正調(diào)節(jié)作用， 體外培養(yǎng)時加入上述細(xì)胞因子可明顯提高NK的殺傷活性。前列腺素 (PG)E1、E2、D2和腎上腺皮質(zhì)等對NK細(xì)胞的活性有抑制作用。

細(xì)胞特性：

1）組織來源于實驗動物的正常外周血組織。

2)細(xì)胞鑒定：CD56或CD16熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長方式：圓形或橢圓形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代 NK 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

ELELISAKit

大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)elisa分析檢測試劑盒

α1-AGP ELISA Kit

人過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)elisa分析檢測試劑盒

HumanPPARGC1ELISAKit

組織尿酸含量酶偶聯(lián)比色法定量檢測試劑盒

牛β內(nèi)啡肽(β-EP)elisa檢測試劑盒

細(xì)胞丙二醛MDA測試盒 400T 微板法

小鼠解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)elisa檢測試劑盒

鴨β干擾素(IFN-β/IFNB)elisa分析檢測試劑盒

IFN-β/IFNB ELISA Kit

人白三烯B4(LTB4)elisa分析檢測試劑盒

LT-B4ELISAKit

細(xì)胞JNK2激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

人肝臟甘油三脂脂肪酶(HTGL)elisa分析檢測試劑盒

大鼠胱抑素SN(CST1)elisa分析檢測試劑盒

植物(擬南芥)超氧化物歧化酶[銅鋅]2,葉綠體(CSD2)elisa分析檢測試劑盒

著絲粒相關(guān)蛋白NSL1抗體

NSL1

9號染色體開放閱讀框57抗體

C9orf57

環(huán)指蛋白調(diào)節(jié)蛋白激酶C蛋白抗體  Anti-TRIM41

早老素蛋白-1抗體  Anti-presenilin 1/PS-1

酪酪肽抗體  Anti-Peptide YY/PYY

絲蛋白酶抑制劑B1抗體  Anti-SERPINB1

Cy5標(biāo)記的小鼠抗兔IgM

大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CTX-Ⅰ)elisa生化檢測試劑盒

CTX-Ⅰ ELISA Kit

人富組蛋白(histatin-5)elisa生化檢測試劑盒

兔NK細(xì)胞Humanhistatin5ELISAKit

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。