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如何正確使用Hcy Elisa試劑盒進行檢測?
點擊次數(shù):323 更新時間:2025-07-27
Hcy Elisa試劑盒是用于體外定量測定人血清或血漿中HCY含量的工具。以下是如何正確使用Hcy ELISA試劑盒進行檢測的步驟:
一、試劑與材料準備
1.試劑盒內(nèi)容:確保試劑盒完整,包括酶標板、標準品、樣本稀釋液、洗滌液、辣根過氧化物酶標記親和素、底物A&B、終止液等。
2.自備材料:蒸餾水、加樣器(5μl、10μl、50μl、100μl、200μl、500μl、1000μl等規(guī)格)、酶標儀、37℃恒溫箱或水浴鍋、吸水紙等。
二、樣本收集與處理
1.血清:室溫下血液自然凝固10~20分鐘后,以2000~3000轉(zhuǎn)/分的速度離心20分鐘左右。仔細收集上清液,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2.血漿:根據(jù)標本要求選擇EDTA、檸檬酸鹽或肝素作為抗凝劑。混合10~20分鐘后,以2000~3000轉(zhuǎn)/分的速度離心20分鐘左右。仔細收集上清液,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
3.其他樣本:如尿液、細胞培養(yǎng)上清液等,也需按相應(yīng)方法進行收集和處理。
三、試劑準備與稀釋
1.標準品稀釋:按照說明書要求,將標準品進行系列稀釋,以制備不同濃度的標準品溶液。
2.洗滌液稀釋:將濃縮洗滌液按說明書要求進行稀釋。
四、檢測步驟
1.加樣:設(shè)置空白孔、標準孔和待測樣品孔。向各孔中加入相應(yīng)體積的標準品、待測樣品和樣本稀釋液。
2.溫育:將反應(yīng)板置于37℃恒溫箱或水浴鍋中溫育一定時間(如60分鐘),使抗原抗體充分結(jié)合。
3.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌數(shù)次(如4~6次),以去除未結(jié)合的試劑。
4.加酶標抗體:向各孔中加入辣根過氧化物酶標記的親和素或相應(yīng)抗體,并再次溫育(如30分鐘)。
5.洗板:重復(fù)洗板步驟。
6.加底物顯色:向各孔中加入底物A和B,置37℃暗處反應(yīng)一定時間(如15分鐘)。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。
7.加終止液:向各孔中加入終止液,終止顯色反應(yīng)。
8.測定OD值:在30分鐘內(nèi),使用酶標儀在450nm波長下測定各孔的OD值。

五、結(jié)果計算與分析
1.繪制標準曲線:以標準品的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線。
2.計算樣品濃度:根據(jù)樣品的OD值,在標準曲線上查出相應(yīng)的Hcy濃度。
六、注意事項
1.試劑儲存:試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀釋過的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。
2.加樣順序與時間:加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
3.洗板:洗滌過程很關(guān)鍵,洗滌不充分將導(dǎo)致精確度誤差及OD值錯誤地升高。
4.避免交叉污染:使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5.樣品保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分在-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。
按照上述步驟操作,即可正確使用Hcy ELISA試劑盒進行檢測。同時,注意實驗過程中的安全和衛(wèi)生,避免對實驗結(jié)果產(chǎn)生干擾。
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